Espressione ed effetti della RNA Binding Protein HuR nelle neoplasie tiroidee

La regolazione dell’espressione genica è un processo essenziale attraverso il quale le cellule reagiscono ai cambiamenti che avvengono nel loro microambiente. Un meccanismo chiave della regolazione dell’espressione genica avviene a livello post-trascrizionale, ovvero sull’RNA, la cui regolazione permette alle cellule di rispondere agli stimoli ambientali in maniera più rapida rispetto alla produzione di trascritti de novo. Dopo la trascrizione, il destino dell’RNA è controllato dalle RNA-binding proteins (RBPs), le quali sono in grado di regolare tutte le fasi della biogenesi dell’RNA, incluso lo splicing, la poliadenilazione, il trasporto nucleo-citoplasmatico, la localizzazione, la traduzione e la degradazione. Poiché le RBPs sono essenziali per i processi cellulari, la loro alterazione, in termini di espressione, attività e interazione con i target, può portare ad una regolazione aberrante dell’espressione genica, con il conseguente sviluppo di patologie tra le quali il cancro. In questa tesi mi sono concentrata su HuR, una RNA-binding protein (RBP) molto studiata in letteratura per il suo ruolo nello sviluppo tumorale di diverse neoplasie. È noto, infatti, che l’over-espressione di HuR nelle cellule neoplastiche caratterizza diversi tipi di tumore. Non esistono, però, dati riguardanti HuR e la sua espressione nei carcinomi tiroidei. Questo studio si è, quindi, posto l’obiettivo di analizzare l’espressione e la funzione di questa RBP nella tumorigenesi tiroidea. In un primo setting sperimentale abbiamo valutato l’espressione di HuR, sia in vivo che in vitro e abbiamo determinato come questa sia over-espressa anche nelle neoplasie tiroidee. In seguito, focalizzandoci su una linea tiroidea non tumorigenica (Nthy-ori-3.1) e su una tumorigenica (BCPAP), abbiamo valutato gli effetti del silenziamento di HuR, sia a livello della vitalità cellulare, sia dell’espressione genica. Abbiamo quindi dimostrato come il silenziamento di HuR induca una riduzione della vitalità cellulare e un aumento dei processi apoptotici in entrambe le linee cellulari. Inoltre, attraverso un’analisi di RNA-seq, abbiamo messo in luce la presenza di diversi profili di espressione genica in risposta al silenziamento di HuR nelle linee cellulari Nthy-ori-3.1 e BCPAP. Al fine di valutare se questi diversi effetti del silenziamento di HuR fossero dovuti alla presenza di profili di legame diversi nelle due linee, abbiamo eseguito una HuR RIP-seq, attraverso la quale è stato possibile valutare come questa RNA Binding Protein leghi mRNA diversi in cellule diverse. Lo studio è quindi proseguito indagando se le cause di questo diverso comportamento di HuR nelle due linee cellulari fossero imputabili a diverse modifiche post-trasduzionali a carico della RBP, attraverso un’analisi elettroforetica bidimensionale. I dati ottenuti in questo studio dimostrano che i target delle RBP possono essere diversi anche in cellule con la stessa origine tissutale, ma con diverso grado di aggressività. Questi risultati potrebbero fornire importanti informazioni per capire l’origine delle alterazioni molecolari presenti nelle cellule tumorali