Ricerca del sito di origine e del ruolo patogenetico degli anticorpi anti-transglutaminasi epidermica nella Dermatite Erpetiforme

La Dermatite Erpetiforme (DE) è una malattia infiammatoria cutanea caratterizzata da vescicole papulari pruriginose e da depositi granulari di IgA in corrispondenza delle papille dermiche o lungo la giunzione derma-epiderma. La malattia è considerata la manifestazione cutanea della celiachia, condividendo con quest’ultima l’origine autoimmune, la predisposizione genetica, la presenza di autoanticorpi IgA a livello sierico e la remissione clinica in seguito all’eliminazione del glutine dalla dieta. La transglutaminasi 3 o epidermica (TG-3 or eTG) rappresenta l’antigene verso cui si sviluppa la reazione autoimmunitaria. Il primo scopo di questo studio è indagare l’origine degli autoanticorpi contro la TG-3, e a tal fine è stata utilizzata la tecnologia delle librerie anticorpali. La fisiologica presenza e produzione dell’antigene riscontrata sia a livello intestinale che periferico, ha suggerito, la possibile genesi degli anticorpi anti TG-3 in entrambi i distretti. Librerie anticorpali, costruite da linfociti B intestinali e periferici di tre pazienti con DE e di tre soggetti di controllo, sono state analizzate mediante il metodo del phage-display e dell’yeast-display. L’approccio utilizzato ha permesso di isolare anticorpi anti TG-3 da entrambi i distretti. Il presente studio si è focalizzato, inoltre, sull’indagine del ruolo patogenetico degli anticorpi anti-TG-3 sulla pelle. A tal fine è stato ideato un modello in vitro, costituito da una linea cellulare primaria di cheratinociti umani. Gli esperimenti di immunofluorescenza e di monitoraggio in Real-Time dopo stimolazione con anticorpi anti-TG-3, hanno escluso la presenza dell’antigene sulla membrana plasmatica. Ne consegue che in questo distretto cellulare non può avvenire il legame tra l’antigene e il suo anticorpo. I risultati osservati e il modello proposto non hanno permesso, pertanto, di indagare ulteriormente il ruolo patologico di questi anticorpi.

Dermatitis herpetiformis (DH) is an inflammatory skin disease characterized by granular IgA deposits in the papillary dermis and represents an extra-intestinal manifestation of coeliac disease (CD). DH and CD are autoimmune diseases, both share a similar genetic HLA background, have serum IgA antibodies and benefit clinical improvement with a gluten free dietary treatment. The epidermal transglutaminase (TG-3) has been recognised as the main autoantigen in DH disease. In this study the presence and the production of TG-3 protein at intestinal and peripheral level are demonstrated. This evidence induced us to investigate the origin’s site of TG-3 antibodies in both areas. To carry out a project, the antibody-Libraries display technologies are used. Antibody-Libraries from intestinal and peripheral B lymphocytes of three DH and three control patients were constructed and examined by using the phage and yeast-display antibody methods. The combination of these technologies allowed to isolate and characterize anti-TG-3 antibodies, suggesting that both, intestinal and peripheral level, could be the primary site of antibodies production. The present study also focused on investigating the pathogenetic role of anti-TG-3 antibodies in DH disease. Human keratinocytes, representing the inflammatory site of DH, are proposed as a suitable in vitro model. The TG-3 protein is detected in the intracellular compartment but not in the plasma membrane, suggesting that the antigen-antibody binding site does not occur on keratinocytes. Therefore, this in-vitro model does not allow to investigate the pathogenetic role of anti-tg3 antibodies.