The principal aim of my PhD was the setting of a protocol for the creation of phage libraries to display cDNA fragments encoding real ORF sequences, that could correspond to potential epitopes. A similar phage display library contains all the potential ORF repertoire of a cell or tissue. This tool can be specially used in the study of autoimmune diseases to perform different kind of analysis, such as the identification of epitopes involved in pathological reaction, the comparison between healthy and pathological conditions, or between different pathological conditions. A complex protocol was developed. It provides for: cDNA normalization, cDNA fragmentation to obtain peptides with useful size, and ORF enrichment to obtain really coding fragments. With this system we have created a epitopes library from Human brain mRNA. Il principale obiettivo del mio lavoro di ricerca è la messa a punto di un protocollo per la costruzione di librerie fagiche di frammenti di cDNA codificanti per frammenti ORF, e che quindi potrebbero corrispondere a potenziali epitopi. Questo tipo di librerie contengono, potenzialmente, tutto il repertorio ORF di una cellula o di un tessuto e possono quindi essere utilizzate nello studio di malattie autoimmuni al fine di identificare nuovi epitopi coinvolti nella risposta immunitaria, di fare un confronto tra lo stato patologico e quello sano o tra diverse condizioni patologiche. Abbiamo quindi messo a punto un complesso protocollo che prevede: la normalizzazione del cDNA, la sua frammentazione per ottenere peptidi di dimensioni opportune, e l'arricchimento in frammenti realmente codificanti. Con questo sistema abbiamo realizzato una libreria di epitopi a partire da mRNA di cervello umano.
